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Química seca - Fotometría de reflectancia.

Química seca y fotometría de reflectancia.

Química seca

Dejando de lado las posibles discrepancias que algunos podamos tener sobre si el uso del término "química seca" es adecuado, es una técnica que consiste en el empleo de reactivos previamente deshidratados en una matriz porosa, generalmente tiras de papel o plástico.

La muestra que tiene el analito a determinar (suero, sangre, orina, etc) se aplica sobre la superficie del reactivo en fase sólida, aqui comienza a difundirse en la matriz disolviendo los reactivos en el proceso, ocurriendo consecuentemente la reaccion que cuantificara el analito.

En química seca, los reactivos se denomina como "reactivos de unidad" debido a que son preparados para una determinación unica y no requieren una preparación previa al análisis.

Actualmente los sistemas reactivos incluyen:
 - Tiras reactivas.
 - Películas multicapa (slides).

La lectura se realiza por inspección visual o por reflectometría (fotometria de reflexión/reflectancia). Existen también peliculas multicapa con electrodos para potenciometría.

Gracias a los analizadores automáticos, la química seca permite analizar muestras tanto en el laboratorio como en el hogar, obteniendo resultados rápidos, precisos y que disminuyen los desechos.

Ventajas de la química seca.
 - Los reactivos pueden almacenarse por mucho mas tiempo.
 - Los reactivos ya vienen preparados listos para ser usados.
 - Precisión y exactitud.
 - El control de calidad se corre diariamente.
 - Calibracion estable por 6 meses o al cambiar lote de reactivos.
 - Requiere muy poco volumen de muestra (10 uL).
 - Equipos sencillos de utilizar.
 - Minifica la interferencia de hemólisis, bilirrubina o lipemia.

Desventajas de la química seca.
 - Altos costos.
 - Se depende de la casa comercial del equipo para todo.




Fotometría de reflectancia.

Cuando un ha de luz incide en una superficie, la luz es reflejada por dicha superficie, produciendo 2 tipos de refleccion: A saber, reflexión especular y reflexión difusa o reflectancia, esta ultima es la utilizada por los espectrofotómetros de reflexion.

La reflectancia (R) es la relación entre la intensidad de la luz reflejada (Ir) y la intensidad de la luz incidente (Io). Se expresa como % de reflectancia.

R = Ir/Io

%R= (Ir/Io) . 100

Estas ecuaciones son similares a las descritas en la espectroscopia de absorción para la transmitancia, sin embargo, linealizar (Ley de beer) no es tan sencillo como en ese caso sino que se utilizan ecuaciones mucho más complejas como lo son las de Kubelka-Munk y Williams-Clapper.

Espectrofotómetro de reflexión.

La fotometría de reflectancia implica la medida de la intensidad de la luz que es reflejada por una fase sólida, tras iluminar ésta con un haz de luz de una longitud de onda que es absorbida por los productos de interés.


Los espectrofotómetros de reflexión miden la reflectancia y la relacionan con la concentración del analito de interés.

espectrofotómetro de reflectancia


Componentes del espectrofotómetro de reflexión

- Fuente de radiación: Lámparas de espectro luminoso continuo de haluro de tungsteno o, lámparas de espectro luminoso discontinuo como el arco de xenón o los LED.

- Sistemas ópticos o esfera de Ulbricht: Conjunto de espejos y lentes en forma de esfera, cuyo fin es dirigir el haz de luz reflejada al detector para su lectura.

- Reactivo en fase sólida: Tiras reactivas o películas multicapa o slide.

- Detector y procesador de datos: Se lee sobre la superficie al usar tiras reactivas, mientras que se lee por el reverso de la superficie para sistemas que utilizan slides.





Sistemas reactivos para química seca

Como se dijo al principio, son unidades de reacción con una fase sólida que posee en forma deshidratada todos los reactantes para la identificación del analito de interés y se clasifican en:

Tiras reactivas.

Son un soporte de plastico con una matriz de celulosa que contiene los reactivos. Se utilizan para pruebas de orina, embarazo, glucosa, HIV (con un buffer), etc. 

- Sistema Seralyzer (Ames): Es una matriz de celulosa impregnada en reactivos secos que se une a una lámina o soporte de plastico, sobre ella lleva un codigo para ser leido al introducirse en el instrumento.

- Sistema Reflotron (Boheringer Mannheim): Es un sistema reactivo dividido en 2 zonas, permite preincubar la muestra y/o eliminar interferencia. Las 2 partes se ponen en contacto para realizar la reacción por presión.

tira reactiva de orina
Cinta apra determinaciones en orina.

Películas multicapas o slides

Esta constituido por diferentes capas muy finas. El formato más popular es el Ektachem de Kodak.


- Capa difusora: es una capa porosa que permite distribuir uniformemente la muestra además de funcionar como filtro, ya que no deja pasar moléculas como proteínas, lípidos, hemoglobina, o bilirrubina. Sirve también como pantalla para la reflexión de la luz.

- Capa de reacción: contiene sustancias que pueden ser enzimas o cualquier sustancia química, que se encuentra en condiciones muy controladas que intervienen en la reacción.

- Capa indicadora: contiene el colorante para formar un complejo colorido, que será proporcional a la concentración del analito, la cual se cuantifica por espectrofotometría de reflexión.

- Capa de soporte: es la base de la laminilla donde están depositadas las demás capas. Está fabricada con un material de plástico transparente que permite que pase la luz para que la reacción pueda ser medida.




Tipos de slides

- Colorimétricas: en la cual se hace una determinación de punto final, ya que hace la medición una vez terminada la reacción. Ejemplo: glucosa, ácido úrico, colesterol.

- Enzimáticas: en la cual se hace una determinación cinetica, es decir, se llevan a cabo varias lecturas durante el curso de la reacción. Ejemplo: lactato deshidrogenasa, amilasa, lipasa.

- Potenciométricas: se mide la diferencia de potencial entre la muestra y el fluido de referencia, por medio de un electrodo de ion selectivo. Permite medir la concentración de electrolitos.


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